Peter Parker/Spider-Man, un lycéen vivant dans le Queens à New York, fan de sciences et de Lego, il mène une double vie de super-héros depuis qu'une morsure d'araignée radioactive lui a donné des pouvoirs d'araignée.

Ned Leeds, Meilleur ami de Peter, ils sont toujours fourrés ensemble et passent régulièrement leurs après midi à construire des Legos. Il est au courant de la double vie de Peter.

Ethel Leckwith, amie de longue date de Peter, elle est passionnée de sciences et est extrêmement bornée. Elle adore se mêler de ce qui ne la regarde pas.

Michelle Jones Alias MJ, amie de Peter et Ned et meilleure amie d'Ethel. Elle est très franche et directe, n'hésitant pas à insulter ou lancer ses 4 vérités à n'importe qui. Elle aime beaucoup l'humour noir.

Tony Stark/Iron Man, PDG de Stark Industries et membre fondateur des Avengers, il est le mentor de Peter et lui fournit tous ses équipements.

May Parker, la tante de Peter qui l'héberge et l'éduque, elle est très proche de son neveu et prête à tout pour lui.

Adrian Toomes/Le Vautour, un trafiquant d'armes extraterrestres qui s'est construit deux immenses ailes mécaniques lui permettant de voler.