Kromě hlavního protagonisty Shinichi Kuda alias Conana Edogawy jsou v Detective Conan i další klíčové postavy. Mezi ně patří Ran Mouri, dívka z okolí Shinichiho, se kterou má hlavní hrdina silné citové pouto. Ran je velmi inteligentní a statečná, což ji činí výbornou asistentkou Conana při řešení případů. Další zajímavou postavou je Ai Haibara, bývalá členka tajné organizace “Černá organizace”, kterou Conan v minulosti odhalil a zničil. Ai se později stala spojenkyní Conana, který ji pomohl při útěku z této organizace. Její technické znalosti a schopnosti jsou velmi užitečné pro řešení složitých případů. Celkově jsou postavy v Detective Conan velmi dobře vykresleny, charakteristické a jsou důležitou součástí úspěchu série.