Câu 3: Phương pháp tách chiết DNA genom và định lượng:

1. DNA có kích thước lớn mọi việc chiết tách cần tránh mọi tác nhân cơ học, hóa học gây gẫy phân tử DNA.

_ Tách tế bào khỏi dịch nuôi cấy bằng cách ly tâm và làm sạch tế bào.

_ Axit nucleic được giải phóng ra khỏi màng tế bào bằng phương pháp hóa học và sinh học để thu dịch chiết tế bào.

_ Loại bỏ các thành phần không mong muốn như protein, lipit, và các thành phần khác bằng kết tủa phân đoạn. Mẫu được lắc mạnh trong hệ dung môi phenol_chloroform để biến tính, kết tủa protein và giải phóng axit nucleic vào dung dịch lỏng.

_ Sau ly tâm cao tốc protein bị biến tính sẽ tách khỏi pha nước có chứa DNA và RNA. Pha giữa chứa protein và các chất thứ cấp. Pha dưới cùng chứa dung dịch phenol_chloroform.

_ Dịch nổi gồm axit nucleic và nước được hút ra và tiếp tục RNA bắng Rnase. Sau đó tách DNA và nước để tiến hành bước phân tích tiếp theo.

_ Kết tủa DNA trong etanol với sự có mặt của Na+ nồng độ cao, nhiệt độ thấp, tỷ lệ giữa etanol và mẫu phân tích là 3:1. Hoặc kết tủa trong isopropanol, tỷ lệ giữa rượu và mẫu là 1:1, phương pháp này không cần sự có mặt của muối và loại được DNA có phân tử lượng thấp.

_ Ly tâm cao tốc và thu nhận DNA dạng cô đặc. DNA được rửa trong etanol 70% để loại isopropanol và muối, thu được DNA tinh khiết.